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          原代细胞培养中常遇到的误区
          点击次数:640 发布日期:2019-3-14  来源:中国微生物菌种查询网
          原代细胞培养中常遇到的误区

          原代细胞(primary culture cell)是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代?#38405;?#30340;细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究,如蛋?#23383;首?#23398;、基因组学、细胞株(系)研究、DNA,RNA和遗传学研究等,还可应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究?#21462;?#21407;代细胞在生物医药领域有不?#21830;?#20195;性作用,市场前景广阔。

          原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为?#32454;?#22320;说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,如果是正常细胞,仍然保留二倍体数。但实际上,通常把第一代至第十代?#38405;?#30340;培养细胞统称为原代细胞培养。
          下面由小编帮大家纠正一下原代细胞培养中产生的问题。

          错误1:一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间

          纠正1:原代细胞对解冻过程非常敏感,因此将小瓶置于37℃水浴锅中,保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶,并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪,以便可以立即用于接种细胞,并置于培养箱中。

          错误2:解冻match小瓶后直接离心原代细胞

          纠正2:我们不建议在解冻后离心细胞,因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住,在?#25351;?#21407;代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。

          错误3:?#24066;?#21407;代细胞变得过于融合

          纠正3:当生长至100%汇合时,原代细胞可以变得衰老。记住,原代细胞不是100%纯,因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95%融合时,对原代细胞进行传代培养。

          错误4:传代原代细胞时过度胰蛋白酶消化

          纠正4:当细胞传代时,使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外,记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶,因为任?#20301;?#24615;的胰蛋白酶都将损伤细胞。

          错误5:原代细胞可以很容易地重新冻存

          纠正5?#21644;?#24120;我们不推荐重新冻存原代细胞,因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感,重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

          错误6:原代细胞可以无限的增殖

          纠正6:与细胞系不同,原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外,如果你正在使用一个增值困难的细胞类型,你应该密切监测细胞形态,因为少量混杂的细胞(如?#19978;?#32500;细胞)可能随着时间的推移,大量生长从而成为主要细胞。

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