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          胎牛血清培养血管平滑肌细胞常用的方法
          点击次数589发布日期2019-3-21 来源本站仅供参考谢绝转载否则责任自负
                胎牛血清培养血管平滑肌细胞常用的方法有贴块法(explant)和酶解离法(enzyme disperse)下面一起来看下这两种方法

          1贴块法

          方法动物经颈动脉放血后在无菌操作下迅速取出胸腹主动脉段置于含Hank's液的平皿中漂洗3次将凝块洗干净后剥除外膜的纤维脂肪层然后纵行切开血管刮除内膜即内皮细胞迅速撕下中膜内中层切成约1mm宽的小条浸泡在含血清的Hank's液中并将撕下小组织块种植于培养瓶壁置于37恒温箱2h左右取出培养?#32771;?#20837;20% HyClone胎牛血清的培养液再放回培养箱内静止培养4天4天后可见细胞从组织中迁移游出

          不同动物血管结构有差异猪和猴较易操作但小动物如兔鼠因其血管小血管壁薄等特点使之难以分离另外组织块太薄不易粘附培养基也使细胞较难生长为了保证培养的成功应注意

          种植组织块的数目如75cm2的长颈瓶组织块不得少于30;

          根据培养细胞的种属加入适量的不同血清一般可加入牛血清若小牛血清增殖效果差应加胎牛血清(FBS)通常浓?#20219;?0%20%;

          培养基的选择常用的有DMEM(Dulbecco's modified Eagles'medium)M199培养基培养兔的平滑肌细胞用DMEM效果较好

          2酶解离法

          沿动脉纵轴切开后刮除内皮细胞撕下中膜的内2/3注意不要混入内皮细胞将组织块切成1-2mm2放入加有3mg/ml胶原酶的无血清M199培养基中37棬0.51.5h离心去上清重复上述消化步骤然后再离心(9000r,4min)收集细胞在5%10%同种血清或HyClone胎牛血清的M199培养基中调整细胞数然后转入3090mm培养皿中培养对于兔子应加入高浓度的谷氨酰胺(0.2g/L)较?#36873;?#19981;同研究者在培养基?#27010;?#24230;以及消化时间等的选择都有很大的差异

                  综上所述贴块法具有获得平滑肌细胞纯度高量多操作简便的优点但用贴块法?#36164;?#24179;滑肌细胞胞质内肌?#21487;?#22833;亚细胞器增加相反酶解离法由于酶的作用使细胞间失去连接细胞内肌丝含量丰富保持收缩型状态培养平滑肌细胞常取材于兔猪鼠猴的胸腹主动脉段由于贴块法和解离法处理方式不同在细胞培养的zui初阶段细胞形态和性质存在差异随着培养时间的延长培养?#32938;?#36235;于一致细胞特性上也趋于近似
          来源上海一研生物科技有限公司
          联系电话021-69985186
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